音叉是一种医疗器械和敲击乐器。音叉是呈“Y”形的钢质或铝合金发声器，各种音叉可因其质量和叉臂长短、粗细不同而在振动时发出不同频率的纯音。音叉检查在鉴别耳聋性质-传音性聋或感音性聋方面，是一种简便可靠的常用诊查方法。此外，用音叉取“标准音”是钢琴调律过程中十分重要的环节之一。它的重要性在于关系到一台钢琴各键音处在什么音高位置上。
音叉主要用于乐器调音，虽然电子调音器现已存在，而且一些音乐家拥有绝对音感。当音叉需要调音时，可以在两端分叉的部分做调整：磨短尖端的部分以频率调高或者修整两叉中间接合处以频率调低；或者调整两尖叉的重量。即便经过调音，音叉的频率仍会因为材料的弹性模数改变而受影响，为了使音叉发出准确的音高，仍应将其封存在温湿度控制良好的地方。大型的音叉通常由电力驱动，因此可不间断地振动。
音叉也用来测试病人的听力，最常用的音叉为C-512。较为低频的音叉（通常是C-128）也作为一项末梢神经系统对振动的感应测试。音叉也作为一些特殊疗法中（如sonopuncture）的治疗工具。约翰·博利厄研究音叉在治疗上的功效，并录制了一张名为“Calendula”的音乐专辑，里面所有的音乐都由音叉演奏。其他如亚顿·威肯及杰克·威肯等也是音叉疗效的研究者。